Agarose LEL/TL
一、核心参数速览
中文名称：琼脂糖-番茄凝集素、LEL-琼脂糖
英文名称：Agarose bound Lycopersicon Esculentum Lectin、Agarose LEL、LEL Agarose、TL Agarose（Tomato Lectin Agarose）
糖特异性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）寡聚体（多聚 GlcNAc 的至少三个重复单元），优先结合多聚乳糖胺结构
厂商：西安强化生物科技
基质：交联 4% 琼脂糖微球，排阻极限约 2 × 10⁷ Da，微球直径 45-165 μm
配体密度：2-5 mg lectin/mL 凝胶（不同供应商规格有差异）
性状：缓冲液中的悬浮液，静置后可见凝胶与缓冲液分层
储存条件：2-8°C，切勿冷冻（DO NOT FREEZE）
二、概念解析：它和 Agarose WGA、Agarose Con A 有什么不同？
Agarose LEL/TL 与之前讨论的凝集素琼脂糖介质共享相同的固相载体设计逻辑，核心差异在糖识别特异性和生物学定位。
LEL 的识别谱。LEL 结合 N-乙酰葡糖胺寡聚体，优先识别多聚乳糖胺结构（即重复的 Galβ1-4GlcNAc 单元，至少三个重复）。这一识别谱与 WGA 部分重叠（WGA 也结合 GlcNAc 二聚体/三聚体），但 LEL 对多聚乳糖胺的偏好更强，结合位点更特异地指向重复的 GlcNAc 单元。Con A 则结合 α-甘露糖/α-葡萄糖，识别谱完全不同。三者覆盖了糖蛋白组学中不同的糖链子集。
血管内皮标记是 LEL 的独特应用。有资料指出，LEL 能特异性结合小鼠血管内皮，被广泛用作血管内皮标记物。这一特性使其在血管生物学、肿瘤血管生成和血脑屏障研究中具有特殊价值。Agarose LEL 则可进一步用于捕获血管内皮相关的糖蛋白，而不仅仅是成像标记。
与 Agarose WGA 的区分。WGA 的糖特异性更偏向 GlcNAc 二聚体/三聚体及唾液酸，而 LEL 要求至少三个 GlcNAc 重复单元的多聚乳糖胺结构。这意味着在富集多聚乳糖胺修饰的蛋白时，LEL 的选择性更高；在需要更广泛覆盖 GlcNAc 修饰蛋白时，WGA 可能更合适。
三、实验中的常见问题
Q1：装柱和平衡怎么操作？
将凝胶从储存瓶中取出所需量（静置后的沉降体积），装入空柱，让缓冲液靠重力流干。用 10 倍柱体积的平衡缓冲液（如 10 mM HEPES，0.15 M NaCl，pH 7.5）洗涤。关键点：LEL 不依赖 Ca²⁺ 或 Mn²⁺ 等二价阳离子（与 Con A 不同），因此平衡缓冲液中不需要额外添加金属离子。重力流过柱即可，不建议加压或抽真空。
Q2：上样和洗脱的条件是什么？
样品应溶于接近中性的缓冲液中。上样后让样品靠重力过柱，收集流出液。洗涤用平衡缓冲液洗去未结合蛋白。洗脱时，使用含 500 mM N-乙酰葡糖胺或几丁质水解物的缓冲液进行竞争性洗脱。此外，也可使用酸性缓冲液（如 0.1 M 甘氨酸-HCl，pH 2.5-3.0）洗脱，洗脱后需立即中和。竞争性糖洗脱条件温和，不会使目标糖蛋白变性；酸性洗脱效率高但可能影响某些蛋白活性。
Q3：凝胶怎么保存和重复使用？
使用后，用数个柱体积的缓冲盐水洗涤凝胶，然后重悬于含 0.08% 叠氮钠的缓冲盐水中保存。切勿冷冻，冷冻会破坏琼脂糖微球结构。有资料标注基质在 pH 3-11 范围内稳定。正确保存条件下，凝胶可稳定使用数月。如果发现凝胶颜色变化、出现大量碎片或结合容量显著下降，应更换新批次。
Q4：为什么洗脱后检测不到目标蛋白？
首先确认样品中目标糖蛋白是否确实含多聚乳糖胺结构（至少三个 GlcNAc 重复单元）。某些糖蛋白的糖链可能被唾液酸或其他糖基遮蔽，LEL 无法接触内部的多聚乳糖胺。如果结合确实发生但洗脱困难，可尝试提高竞争糖浓度至 500 mM 以上，或改用酸性洗脱。此外，检查柱床是否因干燥或气泡导致沟流。
四、相关试剂参考
Agarose WGA (Wheat Germ Agglutinin)
Agarose Con A (Concanavalin A)
Agarose RCA I
Agarose UEA I
LEL (unlabeled)
LEL-FITC
LEL-Biotin
LEL-HRP
WGA (unlabeled)
Chitin Hydrolysate
N-Acetylglucosamine
Glycoprotein Eluting Solution
※ 温馨提示
该试剂为基础科研专用试剂，不可用于临床诊断或治疗。本文档由西安强化生物科技有限公司XAJ整理，数据仅供参考。
